一、大鼠感染模型構(gòu)建實驗設(shè)計

1. 明確研究目的

• 確定研究目標(biāo)（如病原體致病性、免疫應(yīng)答、治療評估等）。

• 選擇適合的病原體（病毒、細菌、寄生蟲、真菌等）。

2. 選擇大鼠品系和年齡

• 品系：SD（Sprague-Dawley）、Wistar大鼠常用；免疫研究可選LEWIS或F344等近交系。

• 年齡/體重：根據(jù)實驗需求選擇幼鼠（免疫發(fā)育）、成年鼠（標(biāo)準(zhǔn)模型）或老年鼠（衰老免疫研究）。

• SPF級動物：確保無特定病原體干擾實驗結(jié)果。

3. 病原體選擇與制備

• 確定病原體株（如流感病毒H1N1、結(jié)核分枝桿菌H37Rv等）。

• 測定病原體滴度（如病毒TCID50、細菌CFU），確保接種劑量準(zhǔn)確。

二、大鼠感染模型構(gòu)建感染途徑與方法

根據(jù)病原體特性選擇感染方式：

1. 呼吸道感染（如流感病毒、結(jié)核桿菌）

• 鼻內(nèi)滴注：麻醉后滴入病原體懸液。

• 氣溶膠暴露：使用霧化裝置模擬自然感染。

2. 消化道感染（如腸道病原體）

• 灌胃：直接注入胃內(nèi)。

• 口服感染：通過飼料或飲水（需控制攝入量）。

3. 注射感染

• 腹腔注射（IP）：適用于全身性感染模型（如敗血癥）。

• 靜脈注射（IV）：用于血液或器官靶向感染。

• 皮下/肌肉注射：局部感染或疫苗研究。

4. 其他途徑

• 創(chuàng)傷感染（皮膚傷口模型）、顱內(nèi)注射（神經(jīng)感染模型）等。

三、感染劑量與監(jiān)測

1. 預(yù)實驗確定劑量

• 通過梯度劑量測試，選擇能引起典型癥狀但不致死的中等劑量（如LD50的10-50%）。

• 參考文獻或預(yù)實驗數(shù)據(jù)優(yōu)化。

2. 感染后監(jiān)測

• 臨床癥狀：體重、活動度、毛發(fā)狀態(tài)、呼吸頻率等。

• 病原學(xué)檢測：qPCR、培養(yǎng)法檢測組織載量（如肺、肝、脾）。

• 免疫指標(biāo)：ELISA檢測血清抗體/細胞因子，流式細胞術(shù)分析免疫細胞亞群。

• 病理學(xué)：解剖觀察病變，HE染色分析組織損傷。

四、對照設(shè)置

1. 陰性對照：PBS或培養(yǎng)基處理的假感染組。

2. 陽性對照：已知致病株或標(biāo)準(zhǔn)治療藥物組（如抗生素治療組）。

3. 空白對照：未處理健康大鼠。

五、注意事項

1. 生物安全

• 根據(jù)病原體等級（BSL-1/2/3）選擇對應(yīng)實驗室，遵守防護規(guī)范。

• 廢棄物需高壓滅菌處理。

2. 倫理審批

• 實驗方案需通過動物倫理委員會審查（遵循3R原則）。

3. 標(biāo)準(zhǔn)化操作

• 統(tǒng)一感染時間、環(huán)境條件（溫度、濕度、光照周期）。

• 避免應(yīng)激（如頻繁抓?。?。

4. 數(shù)據(jù)分析

• 記錄感染后時間點的動態(tài)變化（如病毒載量峰值、抗體產(chǎn)生時間）。

• 使用統(tǒng)計方法（如t檢驗、ANOVA）比較組間差異。

六、常見問題與解決

• 感染失敗：檢查病原體活性、接種劑量或操作誤差。

• 高死亡率：降低接種劑量或調(diào)整大鼠品系（如改用免疫缺陷鼠）。

• 個體差異：增加樣本量（每組至少6-8只）。